項(xiàng)目介紹：

透射電鏡(TEM)利用電子束作光源，用電磁場(chǎng)作透鏡，經(jīng)加速和聚集的電子束投射到非常薄的樣品上，形成明暗不同的影像，TEM在中和物理學(xué)和生物學(xué)相關(guān)的許多科學(xué)領(lǐng)域都是重要的分析方法，如基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究、病毒學(xué)、材料科學(xué)、以及納米技術(shù)、半導(dǎo)體研究等等。透射電子顯微鏡的分辨率比光學(xué)顯微鏡高的很多，分辨力可達(dá)0.2nm，200-200k倍之間連續(xù)可調(diào); 可以用于觀察樣品的精細(xì)結(jié)構(gòu)，甚至可以用于觀察僅僅一列分子的結(jié)構(gòu)。

　　透射電鏡(TEM)，全稱透射電子顯微鏡，是把經(jīng)加速和聚集的電子束投射到超薄切片的樣品上(通常70-90nm)，電子與樣品中的原子碰撞而改變方向，從而產(chǎn)生立體角散射。散射角的大小與樣品的密度、厚度相關(guān)，因此可以形成明暗不同的影像，影像將在放大、聚焦后在成像器件上顯示出來(lái)。是一種高分辨率(0.1nm-0.2nm)、高放大倍數(shù)(0.2K-600K)的顯微鏡。是觀察和研究物質(zhì)超微結(jié)構(gòu)的強(qiáng)有力工具。透射電鏡在細(xì)胞生物學(xué)、組織學(xué)、病毒學(xué)、病理學(xué)、分子生物學(xué)、材料科學(xué)等諸多領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用?？梢杂^測(cè)動(dòng)物植物細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)，如線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、溶酶體、葉綠體、液泡、細(xì)胞內(nèi)生細(xì)菌等結(jié)構(gòu)及病理變化?？梢杂^測(cè)病毒顆粒、外泌體、病原微生物、各類細(xì)菌真菌、納米材料及納米顆粒、晶體結(jié)構(gòu)。

實(shí)驗(yàn)流程：

　　包埋-制片-拍照

結(jié)果展示：

送樣運(yùn)輸要求：

以下所有樣本必須盡量新鮮，固定液或懸浮液都不得冷凍結(jié)冰!

1、動(dòng)物組織樣本

①1-3min內(nèi)取樣，取樣組織2mmX2mm大小，盡量薄。如來(lái)不及修整組織大小可先于電鏡固定液內(nèi)固定半小時(shí)左右待組織變硬以后再修整組織進(jìn)行后固定。超出此范圍后組織會(huì)無(wú)法完全固定，后續(xù)實(shí)驗(yàn)無(wú)法完成，務(wù)必請(qǐng)重視此過(guò)程

②取材時(shí)盡量精確到需要觀察的目的部位(如觀察腎小球取腎皮質(zhì);觀察胰島取胰島豐富的胰尾;皮膚，腸胃等在固定液中易打卷的組織可將組織粘在濾紙上進(jìn)行固定)。

③取材時(shí)一定注意避免鑷子擠壓等機(jī)械損傷，刀片要鋒利避免挫傷組織。

④組織取下后立即投入電鏡固定液內(nèi)室溫固定2h，再轉(zhuǎn)移至4°保存，4°冰袋運(yùn)輸，在保存和運(yùn)輸過(guò)程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。4°時(shí)樣本可保存1個(gè)月左右

2、植物組織樣本

①取材要求同動(dòng)物組織樣本。

②組織投入固定液后需要進(jìn)行真空抽氣讓組織沉底，如無(wú)條件抽氣可用濾紙將組織塞進(jìn)固定液內(nèi)，組織不能漂浮在固定液表面。

3、細(xì)胞樣本

貼壁細(xì)胞：

方法一：

①培養(yǎng)好的細(xì)胞棄培養(yǎng)基，加入2.5%的常溫戊二醛固定液。

②常溫固定5min左右，用細(xì)胞刮(或軟橡膠蓋切得平整小方塊)沿一個(gè)方向輕輕刮下細(xì)胞，切記不要反復(fù)刮，避免細(xì)胞刮破。

③用巴氏吸管把細(xì)胞液吸入離心管內(nèi)，放入離心機(jī)(不超過(guò)3000轉(zhuǎn))，離心2min左右，細(xì)胞團(tuán)要有綠豆大小。

④棄固定液后加新的電鏡固定液，把細(xì)胞團(tuán)輕輕挑起，懸浮于固定液中。

⑥室溫避光固定30min，再轉(zhuǎn)移至4°保存，4°冰袋運(yùn)輸，在保存和運(yùn)輸過(guò)程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。

方法二：(對(duì)細(xì)胞形態(tài)沒(méi)有要求的)

①培養(yǎng)好的細(xì)胞棄培養(yǎng)基，加入胰酶。

②胰酶消化好后(時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng))，用培養(yǎng)基終止消化，用吸管把細(xì)胞吹下來(lái)。吸入離心管，離心(不超過(guò)3000轉(zhuǎn))，2min左右，細(xì)胞團(tuán)要有綠豆大小。

③棄上清，加入2.5%的常溫戊二醛固定液，把細(xì)胞團(tuán)輕輕挑起，懸浮于固定液中。

④室溫避光固定30min，再轉(zhuǎn)移至4°保存，4°冰袋運(yùn)輸，在保存和運(yùn)輸過(guò)程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。

懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞要肉眼可見(jiàn)細(xì)胞沉淀綠豆大小，棄培養(yǎng)基后加電鏡固定液室溫固定2h，再轉(zhuǎn)移至4°保存，4°冰袋運(yùn)輸，在保存和運(yùn)輸過(guò)程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。

4、細(xì)菌樣本

長(zhǎng)于固體培養(yǎng)基的細(xì)菌：連帶著培養(yǎng)基一起挑下細(xì)菌放于電鏡固定液內(nèi)室溫固定2h，再轉(zhuǎn)移至4°保存， 4°冰袋運(yùn)輸，在保存和運(yùn)輸過(guò)程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。

懸浮細(xì)菌孢子等：離心收集細(xì)菌要肉眼可見(jiàn)細(xì)菌沉淀綠豆大小，棄培養(yǎng)基后加電鏡固定液室溫固定2h，再轉(zhuǎn)移至4°保存，4°冰袋運(yùn)輸，在保存和運(yùn)輸過(guò)程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。

5、病毒

破碎組織細(xì)胞，粗離心去除細(xì)胞碎片取上清，超速離心分離出病毒(病毒提取的過(guò)程需要客戶自己完成)。用緩沖液(如PBS)懸浮病毒，遠(yuǎn)距離-80°凍存運(yùn)輸，近距離4°保存運(yùn)輸，盡快滴片做負(fù)染后及時(shí)電鏡觀察拍照。

6、外秘體囊泡等

客戶自己完成外秘體囊泡等的提取收集，用緩沖液(如PBS)或者試劑盒中的保存液懸浮，遠(yuǎn)距離-80°凍存運(yùn)輸，近距離4°保存運(yùn)輸，盡快制片做負(fù)染后及時(shí)電鏡觀察拍照。(因此類樣品極易降解，樣品越新鮮越好，最好數(shù)小時(shí)內(nèi)完成滴片負(fù)染，否則做出的效果很不理想甚至完全觀察不到)

7、納米材料等無(wú)機(jī)材料

直接準(zhǔn)備粉劑或用緩沖液(如PBS)懸浮，常溫保存運(yùn)輸即可(需要超聲的備注)。做負(fù)染后電鏡觀察拍照。

注意事項(xiàng)：

1.拍照需要求簡(jiǎn)潔清楚，有側(cè)重點(diǎn)。需附參考圖或參考文獻(xiàn)(如有特殊要求請(qǐng)?zhí)崆皞渥⒄f(shuō)明)

2.拍照倍數(shù)由參考文獻(xiàn)效果圖來(lái)確定(不同機(jī)器不同廠家倍數(shù)標(biāo)準(zhǔn)不同，不能互通參考)

3.圖片本身左下角附有拍照倍數(shù)(X-K 單位千倍)，右下角附有標(biāo)尺(十格總長(zhǎng)即為標(biāo)尺所注長(zhǎng)度)